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     韓國科學家Mohammad Nazrul Islam等先前開發(fā)了一步測序和無連接酶克隆（SLIC）的方法，它簡單、快速并且成本低。盡管SLIC方法通常作用效果很好，但是有時候它的克隆效率很低，可能是由于T4 DNA聚合酶室溫處理2.5min時導致單鏈DNA區(qū)域形成穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)。為了克服這個問題，通過檢測較短T4 DNA聚合酶在很寬溫度范圍內(nèi)（25℃-75℃）的持續(xù)處理時間（5s-2.5min），韓國科學家Mohammad Nazrul Islam等開發(fā)了一種改進的熱調(diào)節(jié)SLIC方法。當插入的同源片段小于20bp，然后用T4 DNA聚合酶在50度處理30s，這樣的克隆效率zui高。較高的溫度下，這種較短的T4聚合酶幫助增加其兩端插入強二級結(jié)構(gòu)的DNA的克隆效率，增加短片段克隆的SLIC的效率。

原文：

Optimizing T4 DNA polymerase conditions enhances the efficiency of one-step sequence- and ligation-independent cloning. Mohammad Nazrul Islam, Kyeong Won Lee, Hyung-SoonYim et al. BioTechniques 63:125-130 (September 2017).